选择立体声显微镜时需要考虑的关键因素

大约在1890年，美国生物学家和动物学家霍雷肖·s·格里诺(Horatio S. Greenough)提出了一个光学仪器的设计原则，直到今天，这个原则仍然被所有的主要制造商所使用[１－３]．基于“格里诺原理”的立体显微镜提供非常高质量的真实立体图像。在20世纪50年代末，博士伦展示了它的立体缩放®Greenough设计与突破性的创新:一个无级放大(变焦)转换器[3]．几乎所有现代立体声显微镜设计都基于缩放系统。1957年，美国光学公司通过基于望远镜或CMO（普通主要目标188金宝搏怎么注册）原则，用光学器件推出立体声显微镜[3]．这种类型的立体显微镜很快被提供，除了格里诺类型，由于其模块化和高性能的所有制造商。

立体显微镜可以是一个很大的投资，因此，选择过程应该非常认真。为了充分利用显微镜，用户应该问自己以下问题:

• 它涉及筛选和分类吗？
• 是否需要任何样本操作?
• 文档是必要的吗?

• 高分辨率比长工作距离更重要，还是相反?

• 当使用显微镜长达数小时时，考虑人体工程学配件是很重要的，因为它们可以防止重复性劳损。
• 根据不同用户的数量，最好有一个显微镜，可以调整到每个用户的偏好。

• 模块化解决方案可能看起来是一个更高的投资，但从长远来看，他们将节省资金，因为他们的多功能性，能够适应不同的用户，以及各种各样的附加组件和附件。

• 倾向于在相同放大率下工作的用户不需要大的缩放范围。
• 如果工作流需要搜索、查找和示例操作，那么从低到高放大的大缩放范围可能是有用的。
• 在相同的变焦放大倍数下，可以看到更大或更小的物场，这取决于目镜。更大的对象字段允许用户在样本上保持更好的方向。
• 更大的工作距离意味着更大的距离之间的样本和物镜的前镜头，允许更容易处理样本在使用过程中。

• NA值越高，分辨率越高，但通常景深会降低。
• Fusionoptics技术将高分辨率与更多景深结合。

• 平面光学:校正整个物场的图像平整度，这对所有应用都很有用。
• ACHROMAT（消色差）光学：对于真正的颜色再现并不重要的应用，主要评估几何特征。
• 高度消色透镜(apo.；复消色差)光学:用于颜色条纹可能干扰的应用，如那些需要快速颜色变化和结构共域化的应用。
• 传输：对于需要可视化样本的精细细节的应用，那么使用具有更好的光传输的高质量光学器件是有利的。对于苛刻的应用，如研究和开发，具有高透光的光学器件可能会产生差异。
• 颜色再现：如果精确地看到样品的真实颜色很重要，那么应使用高质量的光学和适当的照明。

• 符合人体工程学的配件可以使显微镜工作更容易，并导致更快的工作流程。例如，当通过目镜看样品时，缩放和聚焦旋钮可以轻松调整吗?
• 如果显微镜由不同的用户操作，请确保它可以调整到每个用户的偏好。

• 最佳照明应均匀地照亮整个视野，提供良好的对比度，并准确地揭示样品的真实颜色。

立体显微镜的总放大率是物镜，变焦光学器件和目镜的组合放大功率[4]．
目标具有固定的放大率值。仪器的变焦光学器件允许在缩放系数范围内更改放大率。目镜还具有恒定的放大率值。
为了找出通过目镜观察到的物体的放大倍数，物镜、变焦光学和目镜的放大系数必须相乘。

总放大率的公式是：m_合计活力=m_O.XZ.X M._E.， 在哪里：
m_合计活力总放大率（VIS代表“视觉”）;
m_O.是目标的放大率（对于没有补充镜头的绿藻系统的1倍）;
Z.是缩放因子;和
m_E.是目镜的放大率。

一般来说，值m_O.在0.32倍和2倍之间，对于0.63倍和16倍，而且为m_E.在10x和40倍之间。

放大率对物体场的影响
在调查目镜时，称为物体场的圆形区域变得可见[4]．物体场的直径取决于总放大率。例如，具有10倍倍率的目镜具有23的字段。场数意味着在目标和变焦光学器件的1倍组合放大率下，通过目镜观察的物体的直径为23mm。

景深是由数值孔径、分辨率和放大倍数之间的相关性决定的[5 - 7]．
为了使物体的视觉效果达到最佳状态，现代显微镜的调整可以使景深和分辨率达到最佳平衡。特别是在低放大倍数的情况下，可以通过减小数值孔径来显著增加景深。因此，这是一个根据物体的大小和形状特征找到分辨率和景深的最佳平衡的问题。

高景深和融合技术的高分辨率
从Leica Microsystems的Fusionoptics技术实现了立体声显微镜的复杂光学方法，其允许同时高分辨率和高景深。188金宝搏的网址[8]．通过一条光路，观察者的一只眼睛可以看到高分辨率和低景深的物体的图像。同时，通过另一条光路，另一只眼睛看到同一物体的图像，分辨率较低，景深较高。人类的大脑将这两张独立的图像结合成一个最佳的整体图像，具有高分辨率和高景深的特点。

色差是一种畸变，即透镜不能将所有颜色聚焦到同一会聚点[2,9]．发生，因为镜片具有不同波长的光（镜片的分散）的不同折射率。当撞击远离其中心轴的点处的球形透镜表面撞击的光线被折射到比靠近中心点的点的更大或更小的程度时，发生球面像差。良好光学设计的目的是完全减少或消除色谱和球面像差。以下镜头可用于限制这些问题的效果：

消色差透镜

• 校正了2个波长（红色和绿色），该波长被聚焦在同一平面上。
• 对于视觉频谱范围内的标准应用。

复消色差的透镜

• 校正为3波长(红，绿，蓝)在同一平面聚焦。
• 对于视觉频谱范围和超越的具有最高规格的应用。

平面镜头

• 不规划校正的透镜在整个物体上显示了不均匀的聚焦（视场）。
• 建议用于需要观察大对象字段的应用程序。

工作距离是目标前透镜与样品的顶部之间的距离在焦点之间。通常，随着倍率增加，目标的工作距离降低。工作距离对立体声显微镜的可用性直接影响，特别是用于检查和质量控制任务。

一般来说，人们的体型和工作习惯差异很大。因此，为某一任务配备特殊配件和特定工作距离的显微镜的高度(目镜)可能不适用于每一个用户。如果观看高度过低，观察者在工作时将被迫向前弯曲，导致颈部区域的肌肉紧张[10 - 12]．为了补偿这些高度差异，建议使用可变双目管[１０]．由于模块化产品方法，带有CMO设计的立体显微镜提供了许多方法，使仪器定制到用户的尺寸或工作习惯，因此是首选解决方案。

对立体显微镜来说，正确的照明是一个关键因素[13]．最合适的照明将允许以最佳的方式和可能揭示的新信息来允许感兴趣的样本特征。重要的是，照明适用于所使用的显微镜​​和预期应用。

• 入射光
  用于不透明、不透明的样品。根据样品的纹理和应用要求，许多不同的入射照明解决方案可以提供适当的对比样品细节和感兴趣的特征。指参考13.下面有一些关于立体声显微镜的事件照明的一些例子。
• 透射光
  用于各种透明样品，包括从生物的透明样品，例如模型生物，聚合物和玻璃。
• 标准传输的Brightfield照明
  用于所有类型的透明样本，它提供了高对比度和足够的颜色信息。
• 倾斜传播的照明
  用于几乎透明和无色的样品;可以获得更大的对比和样品的视觉清晰度。
• 暗视野照明
  用于样品的平坦区域上的小功能，这不能轻易与亮野，如裂缝，毛孔，细突起等在闪亮或明亮的样品上看到。它还可用于揭示具有低于分辨率限制的尺寸的样本结构。
• 透明，透明标本的对比方法
  罗特曼或浮雕对比度是一种先进的倾斜照明技术，显示折射率的变化作为亮度的差异。在正浮雕对比下，结构显得凸起，而在倒浮雕对比下，结构显得降低。正起伏对比和反向起伏对比可以更容易区分精细结构，从样本中提取最大信息量。