的斯托克斯位移
荧光是斯托克斯位移的一个重要特征。它描述了不同能级的一个令人兴奋的和一个发射光子。发出的光子荧光染料的波长大于一个令人兴奋的光子。这是由于荧光染料后的能量释放到周围环境很兴奋但是在它释放光子。波长的变化可以区分激动人心和发射光。的吸收和发射能量可以被看作是特定分子物种的特征。
荧光显微镜
荧光显微镜(直立或反向)类似于一个普通的光学显微镜,除了照明是由激光单色光或明亮的和强大的光源像水银蒸汽或氙弧灯。此外,它包含一个激发滤波器和一个发射滤波器。激发过滤器只传送光能够激发标本以其特殊的染料。样品已发出的光通过排放过滤器之前到达探测器。排放过滤器只半透明的不同波长的光,像光线发出的标本。
近年来,led(发光二极管)也被用作荧光显微镜光源。发光二极管发出的光的波长取决于材料用于生产。然而,需要一个激发过滤器在大多数情况下,往往led发光在一个相当广泛的波长范围。
大多数荧光显微镜是epi-fluorescence显微镜。照明器和物镜是放置在相同的标本和光线不通过标本。除了激发和发射滤波器,二向色镜需要这种荧光显微镜。二向色镜允许一定波长的光通过,而其他波长的光反射。过滤器和二向色镜通常插在一起在一个过滤器立方体。
激发光通过激发过滤和指向二向色镜。这反映了光通过客观的标本。荧光染料标本的兴奋和释放光子。这个发射光线通过二向色镜的目的。发射光有一个合适的波长和能够通过。激发光反射的标本不能通过二向色镜,将阻塞。如果激发光可以通过二向色镜就会阻塞,当它达到排放过滤器。光通过排放过滤器可以测量探测器。
不同类型的过滤器是用于荧光显微镜。带通,长和短传球过滤器可以区分。带通滤波器传输一个乐队的波长,而光有更大或更小的波长将会被禁止。长和短传球过滤器过滤器是优势。长通过过滤器传输的光的波长。光的波长超过一定截断值将无法通过。相比之下,短传过滤器传输波长短、长句子。
不同的技术在荧光显微镜
荧光显微镜被广泛使用并提供伟大的特异性。各种技术可以解决不同的问题,甚至规避被恩斯特阿贝的衍射极限。
可以确定分子物种的本地化co-staining的细胞器,如细胞骨架或膜。共焦激光扫描显微镜(样品形貌)可以观察区域的标本没有信号从外面的焦平面,并允许光学切片。全内反射(TIRF)显微镜的观察是一种技术,允许薄地区接近细胞表面。隐失场激发的荧光染料。
技术观察分子物种的动态光漂白后荧光恢复(收紧)。荧光染料在禁区photobleached和原分子的扩散到这个区域可以测量。可以与荧光能量转移(执行互动研究烦恼)显微镜。一个兴奋的捐赠发色团可以传输能量受体荧光染料和激发它。这仅仅是可能的如果都带来了非常密切的合作。如果这些染料的不同的蛋白质,它们只能传输能量,如果蛋白质相互作用发出荧光。
技术允许sub-resolution图像受激发射损耗(发生的显微镜,极化子损耗(德牧)显微镜,单分子基态和损耗显微镜其次是单个分子返回(GSDIM),使光敏化定位显微镜(棕榈重建)和随机光学显微镜(风暴)。sub-resolution显微镜用于这些技术也被称为毫微秒示波器,解决纳米尺度下图像。
