白光激光器

经典激光源通常仅提供一个狭窄的发射。一些气体激光器可以同时发出几条线。最着名的示例是氩气激光器，其可以在蓝绿色范围内有5条线。其他激光器，如染料激光器是可调的，但一次只发出单一颜色。此外，染料激光器非常不稳定，需要一些耐心运行正常。有可调谐的固态激光器，但仅适用于此IR.范围（例如Ti：SA激光器）。除了高复杂性和展示之外，它们也可以一次只发出单个波长，调谐过程非常慢（多秒钟）。

这种情况完全改变了在同时发射宽范围的光源的发明，但在聚焦方面仍然表现得像激光器[1]。

这些来源采用纤维IR.在大约80 MHz时发出光脉冲的激光。该化合物用作“种子”，即提供精确的时钟，但能量相当低。随后在二极管泵浦激光放大器中放大脉冲。放大激光器也是纤维的基础，并且两个系统通过光纤拼接无缝耦合。放大器的输出可以达到约10WIR.光平均功率，但在CA的脉冲中切碎。80 MHz的200 PS。这些高能量脉冲最终聚焦在所谓的光子晶体纤维（PCF）的进入表面上。这些纤维在纤维的中心具有中空管的图案。管图案中的表面的强烈非线性过程，其导致单色光展开到达蓝色或甚至紫外线的宽光谱中，包括组速度分散（最多4个^TH.订购），自我陡峭，拉曼散射和等离子体裂变。

取决于PCF的长度，单色IR.峰值蔓延到高达几百纳米的频谱。典型的纤维长度为0.5至2μm。

类似于使用白色来源的任何其他显微镜，用于荧光照明，白光激光共焦显微镜[2]需要一种方法来选择颜色以具体激发各种荧光料。如果可能，多种颜色对于乘法染色样本的平行激发是有用的。在宽场荧光显微镜中，该任务由激励滤波器进行。具有三个或四个传输带的二色阻滤波器用于多染色样本。

SuperContinuum发出的光束提供更通用的解决方案。声光可调滤波器可以从光谱中挑出单线（其实际上是一个窄点）并将其偏转为不同的方向。宽度的其余部分将直线穿过晶体。由于带有控制偏转的机械激励频率的机械激发频率，随着带的颜色，可以选择来自输入频谱的任何颜色。根据波长，该带的宽度是一些1 ... 3nm。这种绑定中的能量在几毫瓦的范围内，这是足够远的成像并且甚至经常使用Frap.实验。通过添加更多电子驱动器来在晶体中产生机械波，可以将一系列颜色同时直接进入1^英石命令。同时八种颜色是标准（但不是技术限制）。这些带集中的每一个都在波长和强度下调谐。

这种组合使白光激光激光（WLL）成为共聚焦显微镜激发的理想源。它将为所有已知的染料用于可见范围中的所有已知染料，它允许记录励磁光谱，以探索新染料的光谱性能，尤其是原位。如果这对排放收集收集原因或改善相邻染料的分离是必要的，它可以自由调整励磁峰值。

光谱探测器（SP.）设计用于完全控制检测到的发射带的带宽和中心颜色。这保证了最高的吞吐量（传输效率）和最佳分离。作为副作用，SP.检测器允许同时（5个通道）或顺序（最多400个通道）或两种方法的混合模式记录发射光谱。过去，发射颜色与安装在系统中的激光器发射的几条线绑定。通过白光激光（WLL），情况完全变化：随着1nm精度可调的颜色，在整个可见光谱中可提供平滑的激励频谱。结合了SP.可以将伺服控制到激发波长的探测器，这种测量完全自动执行。并且仅通过实现声光束分离器来引导激发和发射光来合理切实可行。

具有可调激励和可调发射，下一步是创建强度的二维相关图[4.]。当需要分离荧光料的复杂混合物时，这种λ-方形图特别有用。当需要表征荧光素或者是新发现或设计的，或者由于微环境条件引起的光谱改变的兴趣，它也是一般的值。

荧光的特征在于发射强度和荧光寿命。为了精确测量寿命，需要脉冲光源。幸运的是，白光激光器是脉冲源，脉冲频率适合典型荧光寿命的需求（其在0.5 ... 5纳秒的范围内）。如果需要更长的脉冲间隔，则脉冲拾取器会降低脉冲频率。当然，白光激光的可调性直接呈现寿命激励光谱，包括下一个逻辑后果：二维激励 - 发射寿命图。

最新技术已启用最后一件事。混合检测器（Hyds）非常敏感，快速，覆盖大的动态范围。它们也提供了一个门控操作模式。与脉冲白光激光器结合，现在可以仅在光脉冲之间的时间内检测荧光发射 - 仅通过在激光脉冲期间收集混合检测器来收集信号。然后检测到的信号是纯荧光发射，并且不含任何反射光。通过这种方法，轻松赢得剩余反射的颜色战。通过将足够的空间留给激发颜色，不需要限制排放集合。甚至可以直接测量激发 - 和超过，然后允许抗Stokes排放的表征。

脉冲和光谱可调白色光激光源，与可调谐声光束分离器组合，可调SP.探测器和门控混合检测器是最新技术的迷人混合。并且，虽然这句话可能听起来有点良好，但它适合这里：它彻底改变了共聚焦显微镜的概念和操作。